糖化血红蛋白检测方法很多,常用的有微柱法离子交换层析、亲和层析、高压液相、免疫凝集、离子捕获法、电泳法等。
离子交换层析,分手工和仪器两种。手工微柱有Bio-RaD和西班牙BIO SYSYEMS等多家公司产品,手工微柱操作受到人工因互影响,可能会洗脱不完全或过度洗脱,并受外界环境温度的影响,而某些红蛋白如HbF异常增加时,也会与糖化血红蛋白同时洗脱肉而使结果产生偏差。相应的仪器以英国DREWSCIENTIFIC公司DS5糖化血红蛋白仪为例(BIO-RAD公司DIASAT亦为同一产品),采用微柱法离子交换层析和梯度洗脱胎技术可全自动分离血红蛋白的变异体与亚型,除可测定糖化血红蛋白外,还可同时检测出HbS与HbC的存在与否,在计算糖化血红蛋白值时会自动扣除变异体产生和影响,从而使结果更为准确、可靠,CV值小于2%。同时该仪器配有专门的稀释溶血器,可直接进行全血操作,5分钟即可报告结果,并自动储存样品的检测结果,层析柱价格也较为低廉。适合于较多标本的医院检测。更大型的仪器有DREW SCIENTIFIC公司的Hb-Gold,除可全自动测定糖化血红蛋白外,还可分离检测血红蛋白的600多种子变异体和亚型,用于地中海贫血等疾病的诊断。
亲和层析是目前糖化血红蛋白检测的新方法,该方法特异性强,不受异常血畿蛋白的干扰。英国DREWSCIENTIFIC公司的DS1糖化血红蛋白分析仪日前刚刚获得美国仪器药品管理署(FDA)的认可获准上市,作为目前世界唯一的快速床边糖化血红蛋白仪,它彩硼酸亲和层析法,只需10ul全血即可在4分钟内快速分离检测糖果化血红蛋白,为临床提供即时的化验结果,从而使医生在患者就诊的第一时间明确诊断并制定相应的治疗方案,特别适合于临床科室使用,尤其对小儿患者而言更有优势。其检测结果也完全达到并超过临床要求,CV值5%以内。
高压液相方法的仪器有Bio-Rad公司的VariantⅡ等,可全自动分离测定糖化血红蛋白及血蛋白的变异体和亚型,但仪器的操作保养要求较高。
免疫凝集法的原理是糖化血红蛋白与相应的单抗结合进而发生凝集反应,通过测定吸光度来表示凝集量,可用于全自动生化分析仪上进行测定。专用的仪器也有Bayer的DCA-2000,要求对样品成批试验。每次试验均应使用一个新试剂盒,操作前应注意混匀试剂。指出的是免疫凝集法测定糖化血红蛋白,精密度较差,CV值一般大小6%。
离子捕获法亦是新近发展起来的新方法,代表仪器有Abbott的IMX,其原理是糖化血红蛋白与相应抗体结合后,联以荧光标记物,而在IMX反应孔中的玻璃纤维预先包被了高分子的四胺合物,使纤维表面带正电,使前述的反应复合物吸附在纤维表面,经过一系列的清洗后测定其荧光强度,从而得到糖化血红蛋白的浓度,该方法适用于成批糖化血红蛋白标本的检测。
电泳方法如毛细管电泳也能分离检测糖化血红蛋白和血红蛋白质的变异体,但目前尚无商品化,具有批量样本通过能力的仪器面世,相当程度地限制了该方法的临床应用。
综上所述,糖化血红蛋白是糖尿病患者疾病控制程度一项良好的指标,糖尿病患者应定期检测糖化血红蛋白,并据此制定,修正相关治疗方案。各医院可根据自身标本的多少,选择使用有关糖化血红蛋白的检测仪器,开展该项目的检测。
采和免疫透射比浊法测定全血中糖化血红蛋白A1c,并对其重复性、准确性、线性范围、相关性实验和干扰实验加以评价。结果:高、低浓度的糖化血红蛋白A1c批内CV分别为3.2%和4.1%,批间CV分别为4.6%和5.8%,总CV分别为6.7%和4.6%,线性范围为2.0%~15%,平均回收率分别为106.7%和102.4%,与微柱法测定结果比较具有良好的相关性(P<0.05),一定程度脂浊和黄疸对测定无明显干扰,抗环血酸对测定无影响,胶乳增强免疫透射比浊法测定糖化血红蛋白A1c具有较好的精密度和准确度,并且快速,灵敏和可靠,适合临床实验室常规检测
采用金标法与免疫比浊法检测临床血标本糖化血红蛋白的含量,对结果进行统计分析,并对两法进行比较。结果表明,金标法重复性好(CV<5%),其检测结果与免疫比浊法之间差异无显著性(P>0.05),且相关性好(r=0.9995);不受高血糖、黄疸、脂浊的干扰,但大批量进行标本检测则较为繁锁,适合中、小型医院临床常规应用
对离子交换高效液相层析法(X),微柱亲和层析手工法(Y1)、胶乳凝集免疫法(Y2)测定糖化血红蛋白进行方法学评价。结果:X、Y1、Y2法和线性范围分别为2.8%~18.0%、3.6%~15.3%、2.3%~15.5%;3种方法的平均回收率无为95%~104%,批内、批间平均变异数均<5%;10.2mmol/L三酰甘油、8.0mmol/L胆固醇、684umol/L胆红素、10.1%HbF对3种方法均无干扰;Y1法测定结果显著高于X法(P<0.01),Y2法测定结果偏低,与X法比较差异有显著性(P<0.05),X、Y1、Y2法的参考范围分别为4.3%~6.7%、3.5%~6.7%.
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