在RIA反应中，标记抗原和特异性抗体的含量极微，形成的标记抗原抗体复合物(B)不能自行沉淀，因此需用一种合适的沉淀剂使它彻底沉淀，以完成与游离标记抗原(F)的分离。另外对小分子量的抗原也可采
取吸附法使B与F分离。
1．第2抗体沉淀法 这是RIA中最常用的一种沉淀方法。将产生特异性抗体(第l抗体)的动物(例如兔)的IgG免疫另一种动物(例如羊)，制得羊抗兔IgG血清(第2抗体)。由于在本反应系统中采用第1、第2两种抗体，故称为双抗体法。在抗原与特异性抗体反应后加入第2抗体，形成由抗原—第1抗体—第2抗体组成的双抗体复合物。但因第1抗体浓度甚低，其复合物亦极少，无法进行离心分离，为此在分离时加人一定量的与第1抗体同种动物的血清或IgG，使之与第2抗体形成可见的沉淀物，与上述抗原的双抗体复合物形成共沉淀。经离心即可使含有结合态抗原(B)的沉淀物沉淀，与上清液中的游离标记抗原(F)分离。
将第2抗体结合在颗粒状的固相载体之上即成为固相第2抗体。利用固相第2抗体分离B、F，操作简便、快速。
2．聚乙二醇(PEG)沉淀法 最近各种RIA反应系统逐渐采用了PEG溶液代替第2抗体作沉淀剂。PEG沉淀剂的主要优点是制备方便，沉淀完全。缺点是非常特异性结合率比用第2抗体为高，且温度高于30℃时沉淀物容易复溶。
3。PR试剂法 是一种将双抗体与PEG二法相结合的方法。此法保持了两者的优点，节省了两者的用量，而且分离快速、简便。
4．活性炭吸附法 小分子游离抗原或半抗原被活性炭吸附，大分子复合物留在溶液中。如在活性炭表面涂上一层葡聚糖，使它表面具有一定孔径的网眼，效果更好。在抗原与特异性抗体反应后，加入葡聚糖—活性炭。放置5～10rain，使游离抗原吸附在活性炭颗粒上，离心使颗粒沉淀，上清液中含有结合的标记抗原。此法适用于测定类固醇激素，强心苷和各种药物，因为它们是相对非极性的，又比抗原抗体复合物小，易被活性炭吸附。
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