艾滋病因危害巨大,其检测结果稍有偏差都会给受检者带来难以承受的灾难。为便于HIV样本的保存,降低运输费用及HIV抗体确证费用,世界各国艾滋病防控领域的学者、研究人员纷纷探索解决方案。来自我国基层的学者经过十几年的钻研,提出的新方法得到了国内多位该领域专家的认可。
血液样本运送须大动干戈
艾滋病的诊断、疫情监测、疗效观察等项目的检测,绝大多数是在我国市或省疾病预防控制中心进行的。基层医疗卫生单位筛查出的HIV抗体呈阳性反应的样本,须由2人或专车送至市或省疾控中心检测。由于用于HIV项目检测的多为血液、血清、血浆等液体样本且具有传染性,运输过程中存在着包装破损、溢漏、渗出等潜在危险,所以需要用密闭而坚固的包装容器。为防万一,还须在内包装周围垫上缓冲吸水材料;又由于血液样本为液体并富含营养,微生物易于繁殖使其腐败变质,因而需要冷藏;再按有关规定进行3层包装。这样,其包装不仅复杂笨重,也浪费了大量的人力、物力与财力。
滤纸干血斑准确性难保证
为解决传统方法在样本保存、运输过程中的繁复,美国食品和药物管理局批准并推广应用“滤纸干血斑技术(DBS)”。
滤纸干血斑技术是将受检人员的血液样本滴在滤纸上,经干燥后即为“滤纸干血斑”。化验时,将干血斑用打孔器从滤纸上取下,放入试管等容器中,加入样本提取液溶解提取一定时间,然后取其中的液体进行HIV项目检测。该技术的优点是将血液滴于滤纸上制成干血斑后,HIV样本失去了感染性,不易腐败变质,便于保存、运输等。但在我国及卢旺达、肯尼亚等国家的实际应用中,却发现在制备干血斑的过程中会有约10%的合格样本变成不合格,从而导致漏诊和误诊。此外,滤纸干血斑样本溶解洗脱时间须24~48小时,且检测时须提前准备。
干血棉球易运输结果准
受滤纸干血斑方法的启发,笔者研究了新的方法——血棉球技术。该技术是将受检人员的血液样本滴在灭菌的医用脱脂棉球上,经干燥后,即成为干血棉球样本。
棉球载体形态为立体球状,柔软蓬松,吸水性极强,每克棉球可容纳12克血液,是滤纸的6倍。所制成的干血棉球样本载量可多可少,少至数微升,多达数毫升,可满足艾滋病、性病等多种疾病项目的检测与复检要求;干血棉球样本溶解洗脱时间只需数十分钟,可当天随时检测。重要的是,含100μl血液的干血棉球样本用100μl提取液提取时,可获取约50μl原浓度血液样本,用原浓度样本检测,提高了检测结果的准确性。
干血棉球技术集合了液态血液样本容量较大、检测结果准确,而滤纸干血斑样本便于保存运输、病毒失去感染性的优点,使二者的优势得到了完美的结合。
联合确证技术简化确诊流程
HIV抗体确证试验也是艾滋病确诊的关键环节。对于筛查试验呈阳性反应的血液样本,再用免疫印迹(WB)等方法做确证试验。只有当确证试验阳性时,才能确诊为艾滋病。实验时,无论每次检测样本是1个还是10个,同样都需要一个检测程序、1个阴性对照、1个弱阳性对照和1个强阳性对照。因而检测样本数量越少,平均每个样本的检测费用越高。所以,为收集较多数量的样本,以降低确证试验费用,确证试验多为每两周检测1次。这样,虽然确证试验费用相对降低,却延长了受检测人员的结果等待时间,并可能造成HIV检测范围的缩小。
针对这种情况,笔者研究设计出“HIV抗体联合确证”技术。这种技术是对筛查试验HIV抗体呈阳性反应的样本进行稀释,通过与WB等确证试验进行对比实验研究,确定当样本稀释多少(X)倍筛查试验仍呈阳性反应时确诊为艾滋病,其假阳性率与WB等确证试验的假阳性率相当。当获得X值后,在实际工作中,将筛查试验呈阳性反应的样本稀释X倍,然后用筛查试剂检测,若仍呈阳性反应便直接确诊为艾滋病;若呈阴性反应,再用WB等确证试验进行确证。为使筛查试验确证HIV抗体结果更加准确,亦可将样本稀释倍数提高到2~4X倍。由于本法在HIV抗体较高浓度时用筛查试验确证,而在HIV抗体较低浓度时用WB等确证试验确证,故称其为“HIV抗体联合确证”。实验证明,该方法确保了HIV抗体联合确证技术与传统HIV抗体确证试验假阳性率一致的极低效果。
干血棉球与HIV抗体联合确证“两项新技术”经评价后,70%以上筛查试验HIV抗体呈阳性反应的样本,可用费用较低的筛查试验在24~48小时获得确证结果。基层筛查室筛查出的70%以上HIV抗体呈阳性反应的样本可在筛查室确证而不必送往确证室。剩余30%以下的筛查试验HIV抗体呈阳性反应而浓度较低不能确证的样本,以及婴幼儿早期诊断、新发感染、病毒载量、病毒耐药性等样本均可以通过邮寄干血棉球的方式运送至省、市疾病预防控制中心检测。
应该说,上述两项成果的设计思路并不复杂,但如果能够经过进一步深入研究加以验证,或许可为我们应对HIV病毒提供帮助。