一、简介
T4 DNA连接酶催化dsDNA平末端或粘性末端相邻核苷酸的5'-磷酸和3'-OH的连接反应。依赖ATP将ssRNA或ssDNA连接到ssRNA或ssDNA分子的5'-P末端, 还能将 [5'-32P]核苷酸、3',5'-双(磷酸)加入到RNA上,但不能和全单链核苷酸连接。本公司所生产T4 DNA连接酶比一般T4 DNA连接酶连接效率要高2-4倍。
二、来源
大肠杆菌
三、产品用途
· 催化dsDNA分子平端或粘性末端间的连接
· 连接单链核苷酸
· 标记RNA 3'-末端
· 环化RNA和DNA寡聚核苷酸
· 克隆长片段cDNA
四、连接酶反应缓冲液:5×
组成:150mM Tris-HCl(pH7.8)
50mM MgCl2
50mM二硫苏糖醇(DTT)
5mM ATP
注意事项:
1、二硫苏糖醇用于保持酶的活性。在10倍浓缩的缓冲液中,DTT在冷冻时有可能析出。如果出现这种情况,将缓冲液涡旋,使沉淀重新溶解即可,对实验结果无影响。
2、为防止ATP和DTT的降解,缓冲液应小量分装,-20℃保存。
五、酶活性定义:
0.01个Weiss单位T4 DNA连接酶定义为16℃、20分钟催化连接1微克Lambda DNA中95%以上 的Hind III片段所需的酶的量。
六、保存条件:
T4 DNA 连接酶保存于下述缓冲液中,-20℃保存。
保存缓冲液组成:
10mM Tris-HCl(pH7.0
50 mM KCl
1 mM二硫苏糖醇(DTT)
0. 1 mM EDTA