Bradford法的优点是:
(1)灵敏度高。据估计比Lowry法约高4倍,其最低蛋白质检测量可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大,蛋白质-染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大得多。
(2)测定快速、简便,只需加一种试剂。完成一个样品的测定,只需要5min左右。由于染料与蛋白质结合的过程大约只要2min即可完成,其颜色可以在1h内保持稳定,且在5min~20min之间,颜色的稳定性最好,因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。
(3)干扰物质少。如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子,Tris缓冲液,蔗糖,甘油,巯基乙醇,EDTA等均不干扰此测定法。
此法的缺点是:
(1)由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此Bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差,在制作标准曲线时通常选用g-球蛋白为标准蛋白质,以减少这方面的偏差。
(2)仍有一些物质干扰此法的测定。主要的干扰物质有:去污剂Triton X-100、十二烷基磺酸钠(SDS)和0.1mol/L的NaOH(如同0.1mol/L的酸干扰Lowary法一样)。
(3)标准曲线也有轻微的非线性,因而不能用Beer定律进行计算,而只能用标准曲线来测定待测蛋白质的浓度。