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菌 物 学 报 15 March 2008, 27(2): 171-176
ISSN1672-6472 CN11-5180Q
2008 Institute of Microbiology, CAS, all rights reserved.
基金项目：2001年国家科技攻关计划引导项目（No. 2001BA744C）；浙江省自然科学基金（No. Y304071）
*Corresponding author. Tel: 0571-86971710; E-mail: jzzhang@zju.edu.cn
收稿日期：2007-05-10，接受日期：2007-07-09
1浙江大学生物技术研究所 杭州 310029
2西北农林科技大学植物保护学院 杨凌 712100
摘 要：铁皮石斛疫病2001年发现在浙江义乌栽培田间，是由疫霉菌引起的。在田间，疫霉菌侵染茎基部，引起当年移植苗根腐、植株枯萎和死亡，但侵染2-3年植株幼嫩顶部仅引起顶枯症状。通过对病原菌形态学、交配型的观察，以及核糖体DNA ITS序列分析，侵染铁皮石斛的5个分离菌株被鉴定为烟草疫霉菌 Phytophthora nicotianae。致病性试验表明，铁皮石斛是烟草疫霉菌的寄主。
关键词：卵菌，鉴定，烟草疫霉菌
The causal agent of Dendrobium candidum blight disease
LI Jing1 ZHANG Jing-Ze1* WU Xiao-Peng1 SHAN Wei-Xing2 XU Tong1
1Biotechnology Institute, Zhejiang University, Hangzhou 310029, China
2College of Plant Protection, Northwest Agriculture & Forestry University, Yangling 712100, China
Abstract：Dendrobium candidum blight caused by Phytophthora species was found for the first time in cultivated field in Yiwu city, Zhejiang province of China in 2001. One-year-old infected transplanting seedlings demonstrate typical symptoms of Phytophthora root rot, wilting and death，whereas 2- to 3-year-old infected plants only have die-back symptoms with almost no root and basal stem rot. Morphological observation, mating types and DNA sequences analyses proved that five isolates of the causal agent were all P. nicotianae. Pathogenicity tests confirmed that D. candidum is a natural host of P. nicotianae.
Key words: Oomycota, identification, Phytophthora nicotianae
铁皮石斛Dendrobium candidum Wall. ex Lindl.是传统的中药材，也作为保健品的原料，有巨大的市场需求和重要的经济价值。由于近年来过度挖掘，目前野生资源已濒临枯竭，人工栽培铁皮石斛已越来越受到重视。浙江省在义乌、天台、富阳、临安、绍兴和萧山等地相继建立了具有一定栽培规模的石斛生产基地。然而，在人工栽培条件下，铁皮石斛经常受到真菌病害的危害（张敬泽和郑小军 2004）。自从2001年来，铁皮石斛疫病在浙江义乌等地不同苗龄上发生，病原菌引起根腐、茎基部腐和顶枯等症状。
铁皮石斛疫病是一种毁灭性的病害，石斛栽培田间一旦发生，常造成严重的经济损失。然而，在自然条件下绝没有观察到石斛疫病的发生。本文主要报道石斛疫病在人工栽培条件下的发生情况以及其病原菌的鉴定结果。
1材料和方法
1.1病害的调查
铁皮石斛疫病的调查是义乌石斛研究所进行的。调查分为普查和定点观察。普查主要对不同地点、不同苗龄、不同环境条件和不同年份疫病发生情况进行系统观察。定点观察选择在疫病发生过的田块中进行。每年在病害发生季节观察病害发生、发展和症状的变化。
1.2 病原菌的分离和保藏
选择性培养基的制备：用玉米粉培养基（corn meal agar，CMA）作为基本培养基，在灭菌冷却到约45℃后，每升培养基加入匹马菌素（pimaricin）5mg、氨比西林（ampicillin） 250mg、利福霉素（rifampicin）10mg、五氯硝基苯（pentachloronitrobenzene）125mg和恶霉灵（hymexazol）50mg，摇匀后倒平皿，制备成选择性培养基。
从田间采集有典型疫病症状的根、茎和叶用于病原菌的分离。将供试样品用自来水冲洗干净后，在室内晾干。从发病部位的病健交界处切取5mm × 5mm的组织块，将组织块移到含选择性培养基的平皿中，在25℃黑暗条件下培养。待长出菌落后，通过挑取菌丝尖端方法对分离的病原菌进行纯化。纯化后的病原菌，保存在含液体石蜡的PDA斜面试管中（室温）。
