微生物学报Acta Microbiologica Sinica
48(9):1227~1233;4 September 2008
志贺毒素2型噬菌体 Min27的stx2基因突变株构建及其感染特性
苏良科1,严亚贤1,陆承平1,2*
(1上海交通大学农业与生物学院,上海市兽医生物技术重点实验室,上海 200240)
(2南京农业大学动物医学院,农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,南京 210095)
摘要:【目的】通过构建一株stx2基因突变的志贺毒素2型噬菌体,来观察它对不同血清型大肠杆菌的感染特性。【方法】利用 噬菌体的Red重组系统,将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌O157:H7 Min27株的stx2基因中,获得O157:H7 Min27的突变菌株Min27(Δstx∷cat)。用丝裂霉素对该突变菌株进行诱导,结合抗性标记和PCR方法筛选出一株突变的志贺毒素2型噬菌体, 命名为 Min27(Δstx∷cat)。采用双层琼脂平板法和氯霉素抗性筛选的方法,观察 Min27(Δstx∷cat) 感染21株不同血清型大肠杆菌后的裂解和溶原转换情况。【结果】2株血清型分别为O60和O138的大肠杆菌可以被 Min27(Δstx∷cat)溶原感染,表现出对氯霉素的抗性,但没有形成噬菌斑,而大肠杆菌MG1655株既可以被溶原又可以被裂解。溶原的菌株经丝裂霉素诱导后,能释放出感染性的 Min27(Δstx∷cat)颗粒,并对大肠杆菌MC1061进行裂解形成噬菌斑。【结论】 Min27(Δstx∷cat)可以感染和溶原特定的大肠杆菌,且溶原菌株能释放出原感染性的噬菌体,显示出 Min27噬菌体具有携带外源基因在若干不同血清型的大肠杆菌间水平转移的能力,为进一步研究Stx噬菌体的感染机理和志贺毒素表达调控奠定了基础。
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