微生物学报 4 May 2009, 49(5):580-584
斯氏假单胞菌A1501固氮新基因PST1305的功能分析
樊慧俐，燕永亮，李燕，平淑珍，张维，陈明，林敏，陆伟＊
中国农业科学院生物技术研究所，北京
摘要：【目的】研究斯氏假单胞菌A1501基因组“固氮岛”中PST1305基因在A1501生物固氮过程中所起的作用。【方法】利用同源重组与三亲接合的方法构建PST1305的非极性突变株。乙炔还原法测定固氮酶活。RT-PCR分析PST1305基因与其周围基因转录单元的关系,Real-Time PCR比较PST1305在最佳固氮与非固氮条件下表达水平的差异。【结果】突变株np1305的固氮酶活显著降低，功能互补菌株np1305Comp 能基本恢复细胞的固氮作用。PST1305与其上游的nifB 、fdxN 、下游的nifQ 等基因位于同一个转录单元，组成一个操纵子。基因芯片表明，PST1305 基因在固氮比非固氮条件下表达量显著上调（约38.7倍），Real-Time PCR 验证支持这一结果。【结论】PST1305基因参与固氮过程，其突变会影响固氮酶的活性，该基因可能通过参与A1501固氮酶电子传递或者固氮酶的氧保护过程影响固氮效率。
关键词：斯氏假单胞菌A1501 ；生物固氮；Real-Time PCR ；固氮新基因
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