微生物学报 4 May 2009, 49(5):597-602
重组β-葡萄糖苷酶生产龙胆低聚糖的工艺条件优化
刘玲玲 ，朱松 ，朱婷 ，张敏 ，吴敬 ，陈坚
1江南大学，食品科学与技术国家重点实验室，无锡 214122
2江南大学生物工程学院，工业生物技术教育部重点实验室，无锡 214122
摘要：【目的】β-葡萄糖苷酶可用于酶法生产龙胆低聚糖。为了给龙胆低聚糖的生产提供大量的酶来源，构建基因工程菌表达黑曲霉（CMI CC 324626）β-葡萄糖苷酶基因（bgl ）并研究重组酶生产龙胆低聚糖的工艺条件。【方法】将bgl克隆到表达载体pPIC9K ，转化毕赤酵母（Pichia pastoris）KM71 。表达产物通过HPLC和LC-MS鉴定了其可用于生产龙胆低聚糖的转苷活性，并对酶转化葡萄糖生产龙胆低聚糖的反应条件进行了优化。【结果】实现了β-葡萄糖苷酶的过量表达。当底物葡萄糖浓度为80%，反应 pH4.5，温度为60℃，加酶量为每克葡萄糖60U，添加1mmol/L 的K+ ，转化周期为48h ，龙胆低聚糖累计达到最大为 50g/L。【结论】本研究是国内外首次利用重组酶酶法生产龙胆低聚糖的报道。
关键词：龙胆低聚糖；酶转化；β-葡萄糖苷酶；表达；毕赤酵母
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