1、 干制标本
植物腊叶标本 植物腊叶标本要保管在密封干燥的腊叶标本橱内
新制标本 因为常有害虫和虫卵寄生,入橱最好用 药消毒。就是用二硫化碳约0。5KG盛在容器内,放入杀虫箱(1。7平方米)中,两日后开箱,使毒气散尽,拿出标本。二硫化碳气体比空氧重。药品应放在标本上面。或者把未上台纸的标本放入0。5%升汞酒精(工业用75%)溶液中浸一次,制好后入橱。升汞)有毒,并不能与金属起化学作用,切忌使用金属器械。用时要带橡皮手套,事后用肥皂北朝洗手,标本用什么药品杀虫,应在台纸上注明,以防中毒。
腊叶标本橱内要放樟脑精以防虫害。
分类 入橱标本要进行分类才便于利用。植物根、茎、叶花果实的干制标本,可按课本上的次序排列。分类标本在按照分类系统,分科排列。目前标本室常用的分类系统有恩格斯(AENGLER)、克朗奎(A。CRONGUIST)等分类系统。橱门上应有分科目录表,橱内要有分科标签,便于查找。
维修 如果标本中的叶片脱落,可用毛笔刷胶水(植物胶)在叶背面,按照自然姿态贴好,阴干。枝茎断裂的要用醋酸乙烯胶粘贴,再贴上胶水纸。发霉和虫蛀的标本,用毛笔蘸95%酒精或10%福尔马林液洗刷,干后用毛笔刷除霉斑。台纸和盖纸破损的要调换新的。
移动标本,手脚要轻,不要翻转颠倒。入橱标本,不要太挤。标本外借,要多用填纸包装,注意防潮。
植物种子标本 要选择典型无病虫害的新种子,清除杂质后晒干,装入种子瓶中,并贴上标签,经常检查,以防发霉虫蛀。
昆虫标本和植物病虫害等盒装标本 大型昆虫的腹部和柔软部分以及烘干的幼虫,都容易发霉。盒装的昆虫生活史、病虫害等标本里的安瓿容易破碎和标签脱落,可将损坏部分掉换℃℃。植物损坏部分可按照维修腊叶标本方法维修。盒装标本内应放入樟脑、硅胶等防虫防潮药品。
其它 化石标本要防止震动和碰撞,损坏时用石膏填补和聚醋酸乙烯胶(乳白胶水)粘接。鸟卵标本卵壳损坏,可分块取下粘贴。循环系统干制标本是用赛璐珞作填充物的,脆性大,要防震,如果损坏,可以用毛笔蘸丙酮液粘接。
浸制标本和材料
浸制标本和实验材料都应有标签,标签要贴实,外面涂蜡,按编号平稳地放入生物橱中保存。标本瓶不能震动,以免打碎,并且不宜放在有阳光直接照射、高温或0℃以下的地放,以防封蜡熔化和玻璃瓶冻裂。植物实验材料也可以不用药液浸制,标本瓶底放些浸有20%福尔马林的药棉,上盖白纸,再封口材料多时可以在塑料袋里放少量20%福尔马林液体,再放入实验材料,扎紧袋口。也能长期保存。要用登记簿按记号记下每瓶标本的制作日期和药液配方,便于日后检查处理。原色标本要放在有板门的生物橱内,防止因阳光照射而退色。溶液发黄浑浊和标本露出液面,要及时更换和补充新液(加10%福尔马林等)。
如果保存的实验材料将要变质,可增加保存液浓度。浸制透明标本会产生许多气泡,可用注射器抽出。标本上贴字号等如果落下,可用药棉吸干脱落部位,用明胶液(明胶克,浸在50毫升水中泡一天后,再隔水加热到溶化)粘贴。如果固定标本的玻璃板打碎,用钻石刀划好玻璃,用砂轮奖四边磨平,重新固定放入。
加换溶液和封瓶宜在夏季进行,因为夏季瓶盖容易开启,转动盖上的玻璃球,然后拨出瓶盖。也可用刀尖除去封蜡后开瓶。
剥制标本
剥制标本应按号放在生物橱中,过大的要自制玻璃橱箱存放,要防潮、防腐、防尘、防虫、防鼠。橱内用硅胶或生石灰(用两层纱布包好)作干燥剂,用樟脑制剂驱虫防霉(用纱布包好)。剥制标本不能长期裸露放在橱顶上积尘。新剥制的未干标本不要放入生物橱。
可以用烟熏剂消灭害虫,在春季,把标本放在消毒箱里,箱里放碟子,上面放碗,碗里放硫磺,碗上放铁片条,点着硫磺,密封箱盖。两日后打开箱盖,拿出标本放入生物橱中保存。
脊椎动物标本如果损坏,要选用种类、性别、大小相似的动物,切下损坏的相应部分,用大头针固定,涂上40%福尔马林液防腐,干后作修补用材料。修补后再整形涂色。如鱼的鳍条、爬行动物的趾骨等断裂,可切成两个斜面,用聚醋酸乙烯胶帖。大型哺乳动物缺损可用油灰填补,再拔下腋窝、腹部等处毛,用聚醋酸乙烯胶帖在油灰上。
骨骼标本
骨骼标本要防止震动和撞散,用后盖好。受潮脱胶,关节容易掉落。阳光久射要发黄变色。骨骼断裂或脱落时,可用聚醋酸乙烯胶帖(用线固定)。
切片标本
切片标本要编号放在特别分格切片的木盒内,盒内两侧刻很多凹沟,载波片的两侧沿凹沟插入,使载玻片直立在盒中。每盒可装50~100片。盒子要直放,使标本保持平放位置。盒内应有每片标本的编号和名称目录,以方便查找使用。木盒应放在干燥地方,避免日光照射。切片也可用玻片标本夹(格隔)保存。
常用染料性能简介
(一)天然染料
1、苏木精 苏木精是从南美的苏木(热带豆科植物)干枝中用乙醚浸制出来的一种色素,是最常用的染料之一。苏木精不能直接染色,必须暴露在通气的地方,使他变成氧化苏木精(又叫苏木素)后才能使用,这叫做"成熟"。苏木精的"成熟"过程需时较长,配置后时间愈久,染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。
苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体,易溶于酒精,微溶于水和甘油,是染细胞核的优良材料,他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异,用酸性溶液(如盐酸-酒精)分化后呈红色,水洗后仍恢复青蓝色,用碱性溶液(如氨水)分化后呈蓝色,水洗后呈蓝黑色。
2、洋红 洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后,磨成粉末,提取出虫红,再用明矾处理,除去其中杂质,就制成洋红。单纯的洋红不能染色,要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸,碱性溶液有氨水、硼砂等。
洋红使细胞核的优良染料,染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜,尤其适宜于小型材料的整体染色。用洋红配成的溶液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。
(二)人工染料
人工染料,即苯胺染料或煤焦油染料,种类很多,应用极广。它的缺点是经日光照射容易褪色,苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度,并避免日光直射,也能经几年不褪色。
1、酸性品红 酸性品红是酸性染料,呈红色粉末状,能容于水,略溶于酒精(0.3%)。他是良好的细胞制染色剂,在动物制片上应用很广,在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。他跟甲基绿同染,能显示线粒体。
组织切片在染色前先浸在带酸性的水中,可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用,所以染色过度,易在自来水中褪色。
2、刚果红 刚果红是酸性染料,呈枣红色粉末状,能溶于水喝酒精,遇酸呈蓝色。他能作染料,也用作指示剂。他在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。他用来染细胞质时,能把胶制或纤维素染成红色。在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木静作二重染色,也可用作类淀粉染色,由于他能溶于水和酒精,所以洗涤和脱水处理要迅速。
3、甲基蓝 甲基蓝是弱酸性染料,能溶于水和酒精。甲基蓝在动植物的制片技术方面应用极广。他跟伊红合用能染神经细胞,也是细菌制片中不可缺少的染料。它的水溶液是原生动物的活体染色剂。甲基蓝极易氧化,因此用他染色后不能长久保存。
4、固绿 固绿是酸性染料,能溶于水(溶解度为4%)和酒精(溶解度为9%)。固绿是一种染含有浆质的纤维素细胞组织的染色剂,在染细胞和植物组织上应用极广。他和苏木精、番红并列为植物组织学上三中最常用的染料。
5、苏丹Ⅲ 苏丹Ⅲ是弱酸性染料,呈红色粉末状,易溶于脂肪和酒精(溶解度为0.15%)。苏丹Ⅲ是脂肪染色剂。
6、伊红 这类染料种类很多。常用的伊红Y,是酸性染料,呈红色带蓝的小结晶或棕色粉末状,溶于水(15摄氏度是溶解度达44%)和酒精(溶于无水酒精的溶解度为2%)。伊红在动物制片中广泛应用,是很好的细胞质染料,常用作苏木精的衬染剂。
7、碱性品(复)红 碱性品红是碱性染料,呈暗红色粉末或结晶状,能溶于水(溶解度1%)和酒精(溶解度8%)。碱性品红在生物学制片中用途很广,可用来染色胶原纤维、弹性纤维、嗜复红性颗粒和中枢神经组织的核质。在生物学制片中用来染维管束植物的木质化壁,又作为原球藻、轮藻的整体染色。在细菌学制片中,长用来鉴别结核杆菌。在 尔根氏反应中用作组织化学试剂,已核查脱氧核糖核酸。
8、结晶紫 结晶紫是碱性染料,能溶于水(溶解度9%)和酒精(溶解度8.75%)。结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广,是一种优良的染色剂。他是细胞核染色常用的,用来显示染色体的中心体,并可染淀粉、纤维蛋白、神经胶质等。凡是用番红和苏木精或其他染料染细胞核不能成功时,用它能得到良好的结果。用番红和结晶紫作染色体的二重染色,染色体染成红色,纺锤丝染成紫色,所以也是一种显示细胞分裂的优良染色剂。用结晶紫染纤毛,效果也很好。用结晶紫染色的切片,缺点是不易长久保存。
9、龙胆紫 龙胆紫是混合的碱性染料,主要是结晶紫和甲基紫的混合物。在必要是,龙胆紫能跟结晶紫互相替用。医药上用的紫药水,主要成分是甲基紫,需要时能代替龙胆紫和结晶紫。
10、中性红 中性红是弱碱性染料,呈红色粉末状,能溶于水(溶解度4%)和酒精(溶解度1.8%)。它的碱性溶液中呈现黄色,在强碱性溶液中呈蓝色,而在弱酸性溶液中呈红色,所以能用作指示剂。中性红无毒,常做活体染色的染料,用来染原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。陈久的中性红水溶液,用作显示尼尔体的常用染料。
11、番红 番红是碱性染料,能溶于水和酒精。番红是细胞学和动植物组织学生常用的染料,能染细胞核、染色体和植物蛋白质,示维管束植物木质化、木栓化和角质化的组织,还能染孢子囊。
12、亚甲蓝或美蓝 亚甲蓝或美蓝是碱性染料,呈蓝色粉末状,能溶于水(溶解度9.5%)和酒精(溶解度6%)。亚甲蓝是动物学和细胞学染色上十分重要的细胞核染料,其优点是染色不会过深。
13、甲基绿 甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状,能溶于水(溶解度8%)和酒精(溶解度3%)。甲基绿是最有价值的细胞和染色剂,细胞学上常用来染染色质,跟酸性品红一起可作植物木质部的染色。
二、常用药品试剂和培养基的配制
(一) 反应剂
1、检查葡萄糖试剂
配方一 本尼迪克(Benedict)溶液
(1) 在400毫升蒸馏水中溶解85克柠檬酸钠和50克无水碳酸钠。
(2) 在50毫升加热的蒸馏水中溶解8.5克硫酸铜。
把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中,边加边搅拌,如果产生沉淀,要过滤。本尼迪克溶液配制后能长期使用(存放时间较久而产生沉淀是,取上层清液使用,不必重新配制)。
本尼迪克溶液用来测试食物、血液和尿中的葡萄糖,可测出0.15 ~0.20%的葡萄糖。这种溶液跟未知物同加热时,如果未知物中有葡萄糖,会形成红色的氧化亚铜沉淀物。
配方二 裴林(Fehling)溶液
(1)把34.5克硫酸铜溶于500毫升蒸馏水中。
(2)把125克氢氧化钾(钠)和173克酒石酸钾钠溶解在500毫升蒸馏水中。
上述两种溶液应分别保存。在检测葡萄糖时,使他们等量的混合,加入待测物的试管内,加热到沸腾。如果有葡萄糖,会形成红色的氧化亚铜沉淀物。
2、检查淀粉的试剂
鲁哥氏(Lugol's)溶液(碘液)
取6克碘化钾溶于20毫升蒸馏水中,搅拌到溶解后,加入4克碘,等碘充分溶解,在加入80毫升蒸馏水,贮存在棕色试剂瓶内。
碘液用来测试食物样品或叶片中的淀粉,也用作染色剂,例如可染色鞭毛、纤毛和细胞核等。
3、检查蛋白质的试剂
配方一 米伦(Millon)试剂
在60毫升浓硝酸(比重1.42)中溶解40克汞(水浴加温可助溶),溶解后加入两倍体积的蒸馏水稀释,静置澄清后,取它上层的清液备用。这种试剂可长期保存。
在待测物中加入少量米伦试剂,加热,如果有蛋白质,会出现红色。这种试剂不能用来测定尿中的蛋白质。
配方二 双缩尿试剂
分别配制10%氢氧化钠溶液和1%硫酸铜溶液。
在3毫升待测物中加入1毫升10%氢氧化钠溶液和1滴1%硫酸铜溶液。如果有蛋白质,会出现紫色反应。
4、检查脂肪的试剂
苏丹Ⅲ(Ⅳ)酒精饱和溶液
取0.2克苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ),放入纯酒精中,加热,使它充分溶解,成为饱和酒精溶液,过滤后密闭在试剂瓶内保存备用。
5、酸碱指示剂
配方一 酚酞试剂和试纸
酚酞试剂 取1克酚酞,溶解在100毫升60%的酒精溶液里,装在试剂瓶内密闭保存。
酚态试纸 取1克酚酞,溶解在100毫升95%酒精溶液里,加入00毫升蒸馏水。把绿纸条放入酚酞溶液中浸湿后,取出,放在无氨气影响处晾干。
酚泰试剂(试纸) pH值变色范围8.2~10,在酸性和中性溶液中都无色,再碱性溶液中呈深红色。
配方二 红蓝石蕊试纸
取市售石蕊1克,放在80毫升10%酒精溶液中搅拌,使它溶解,然后过滤。把滤液分成两份。1份滴入稀磷酸或稀硫酸,到出现红色为止。另1份滴入稀氢氧化钠溶液,到出现蓝色为止。在上述制备的溶液中分别浸湿滤纸条,随后取出滤纸条,放在蔽光处、无酸碱性气体影响的地方晾干,即的红、蓝两种石蕊试纸。
红石蕊试纸在碱性溶液中变蓝,蓝石蕊试纸在酸性溶液中变红。
6、检查二氧化碳的试剂
检查二氧化碳的试剂,可用溴代麝香草酚蓝溶液和石灰水。
配方一 溴代麝香草酚蓝溶液
取0.1克溴代麝香草酚蓝,溶解在100毫升蒸馏水里,滴入少量0.1%氢氧化钾溶液,使它成为弱碱性溶液而呈蓝色。
溴代麝香草酚蓝溶液pH值变色范围是6.0(黄)~7.6(蓝)。待测物中如果有二氧化碳,会形成碳酸而使溶液变成黄色。
配方二 石灰水
在蒸馏水中加入生石灰(氧化钙),变加边搅拌,直到加入的生石灰不再溶解,呈饱和状态时为止。在石灰水澄清后,倾出上层清液,用滤纸过滤,放在密闭瓶内保存。
如果测定的物质中有二氧化碳,会生成碳酸钙,使石灰水变浑浊。
7、检查细胞生活力的试剂
检查细胞有无生活力,可用中性红甲基蓝试剂。配制的方法是先分别配制1%中性红溶液和1%甲基蓝溶液,这两种溶液各取1份混合,用来鉴定细胞的死活。该试剂使活细胞的液泡染上红色,而使死细胞全部染成蓝色。