中国农业大学巩志忠教授撰写的文章发表于2006年1月的美国著名杂志《The Plant Cell》上。
《The Plant Cell》(ISSN 1040-4651)是由美国植物生理学会(ASPB)出版发行的著名学术期刊,创刊于1989年。在创刊后的三年内,该杂志即成为植物学领域基础方面最有影响的顶级学术刊物。刊发文章主要是有关植物有机体, 包括高等植物和低等植物、植物型原生生物、植物病毒和真菌等的基本细胞过程, 侧重基因表达调节、植物发育的分子和遗传基础、植物与微生物相互作用、植物细胞机体形成与机能的分子问题研究方面的文章。
巩志忠教授这篇文章题为“ROR1/RPA2A, a Putative Replication Protein A2, Functions in Epigenetic Gene Silencing and in Regulation of Meristem Development in Arabidopsis W”。全文共18页,文章摘要如下:
拟南芥中编码DNA糖基化酶的ROS1基因突变后使转基因ProRD29A: LUC的启动子区发生超甲基化,表现出转录水平的基因沉默现象,而与其相邻的转基因 Pro35S: NPTII启动子区的甲基化没有变化却同样发生了转录水平的基因沉默。我们利用沉默的Pro35S: NPTII转基因作为筛选标记,从ros1突变体背景的诱变后代中筛选出了ros1突变的抑制因子ror1(suppressor of ros1)的两个等位突变体ror1-1ros1和ror1-2ros1。ROR1基因的突变能够使ros1突变背景中沉默状态的Pro35S: NPTII基因恢复表达,但是对ProRD29A: LUC基因的沉默状态却没有影响。ror1ros1突变体中内源TSI基因的表达量比ros1突变体和C24野生型(ros1突变体的背景)都高。除了RD29A启动子区外,rDNA区和着丝粒区的DNA甲基化都不受ror1突变的影响。然而,染色质免疫共沉淀结果显示,相对于ros1突变体,ror1ros1突变体中35S启动子区的组蛋白H3-K9的二甲基化程度降低了,而组蛋白H3的乙酰化程度则升高了。这说明ror1突变引起的Pro35S: NPTII区域基因沉默的释放与DNA甲基化变化无关而与组蛋白的修饰状态的变化相关。ror1ros1突变体表现出明显的发育上的异常表型,如植株矮小、早花等,一些突变体在发育晚期还出现末端花结构异常的表型。图位克隆基因定位的结果显示ROR1基因编码一个拟南芥中DNA复制蛋白A2(RPA2A,At2g24490)。
ROR1/RPA2A基因在根尖及茎尖的分生组织表达量都很高。ROR1/RPA2A基因突变会影响分生组织中细胞的分裂,而对细胞最终的大小没有影响。细胞亚定位分析说明ROR1蛋白定位于细胞核内,酵母双杂交体外实验证明ROR1蛋白与ROS1蛋白互作。我们的研究揭示了拟南芥的DNA复制蛋白A2在表观基因沉默以及发育调节过程中的重要作用。