生物谷报道：来自冷泉港1月2日的消息，本月出版的“Cold Spring Harbor Protocols”提供了一些蛋白成像的新方法，能帮助科学家们观测染色体和胚胎中蛋白动力学，这些方法还包括了如何将细菌lac操纵子多拷贝序列插入到哺乳动物细胞染色体中等。而且这些方法都可以免费在线获得（www.cshprotocols.org）。
第一个指南手册，链接为www.cshprotocols.org/cgi/content/full/2008/2/pdb.prot4903，描述了如何将细菌lac操纵子多拷贝序列插入到哺乳动物细胞染色体中，这些指南还包括了如何稳定重复子，以及分离在目标染色体位点进行了标记的特殊细胞克隆的一些实验技巧。
一旦标记细胞系建立起来了，就能利用荧光标记过的Lac抑制蛋白（这些荧光标记结合在lac操纵子序列）观测目标染色体区域，从而科学家们就能观测染色质结构，以及复制和转录过程中染色体的活动。
这些方法由伊利诺斯大学香槟分校（University of Illinois at Urbana-Champaign，生物谷注）的Andrew Belmont研究小组提供，Belmont实验室和其它实验室利用这一方法研究了活细胞培养物、酵母、不同多细胞生物，比如线虫，果蝇和拟南芥中染色质的结构和动力学特征。
本期“Cold Spring Harbor Protocols”提供的第二个方法则说明了如何在整个小鼠胚胎中进行免疫组化（immunohistochemistry，生物谷注），这种方法能帮助科学家们在发育的特殊阶段，研究一种蛋白的三维分布，这可以用在检测内生性的蛋白，以及转基因产物上。
免疫组化指南来自于在其它生物中，包括非洲爪蟾和果蝇中用于检测胚胎发育的方法，这种方法描述了几种化学和物理手段操作胚胎的技巧，帮助抗体——检测目标蛋白的存在——能有效的渗入到胚胎组织中。
附：
免疫组化基础知识
免疫组织化学的概念：
免疫组化是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、
酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。
免疫组化实验所用的抗体有哪些？
免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。
免疫组化实验所用的组织和细胞标本有哪些？
实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理大片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。
其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。
石蜡切片为什么要做抗原修复？有哪些方法？
石蜡切片标本均用甲醛固定，使得细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇，同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。所以要求在进行IHC染色时，需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。
常用的抗原修复方法有微波修复法，高压加热法，酶消化法，水煮加热法等，常用的修复液是pH6.0的0.01 mol/L的柠檬酸盐缓冲液。
免疫组化常用的染色方法有哪些？
根据标记物的不同分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高，有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素——抗生物素染色法最常用。
抗体交叉反应的原因：
指抗体除与其相应的抗原发生特异性反应外还与其它抗原发生反应。产生的原因有以下几个方面：
1. 抗原特异性指用于免疫动物的抗原性物质中含有多种抗原分子，它引起动物产生针对多种抗原分子特异性的相应抗体。任何其它物质只要含有一种或多种与上述物质相同的抗原分子，必将与上述多特异性的抗血清发生交叉反应。
2. 共同决定簇即两种抗原分子中都含有相同的抗原决定簇。
3. 决定簇相似，两种不同的抗原决定簇，如果结构大致相同，由于空间构象关系，某一决定簇的相应抗体可以与大致相同的决定簇发生交叉反应。当然抗原一抗体之间构象相似时的结合力小于吻合时的结合力。
多抗和单抗特性比较：
1.均一性。一种单抗中，每个抗体的化学结构和氨基酸顺序都相同，只有一种Ig亚类。即单抗是一种纯度很高的均一抗体。而从不同动物，不同时期所得到的多抗，各有不同的化学组成。多抗是多种种类和亚类Ig的混合物。
2. 稳定性。单抗的稳定较差，对PH变化敏感，对热不稳定，提纯过程中易变性，而多抗的稳定性则较好。
3. 特异性。单抗是单一地针对抗原的某一决定簇，所以用它进行血清学反应时，特异性强，敏感性高，一般不发生交叉反应。而多抗能与抗原上的多种抗原决定簇结合，所以特异性较差，较易引起交叉反应。
4.重复性。单抗的重复性好，而多抗每批都不一样。
5. 沉淀反应。多抗由于与抗原多价结合容易形成网络样沉淀，而单抗只与抗原结合产生二聚体，不能直接形成抗原抗体沉淀物。
