PTGS 转录后基因沉默(post transcriptional gene silencing)一种首先在植物中确定,然后发现在动物中也存在的现象。尽管PTGS最初被描述作一种病毒防御和转位子沉默的内源方法,现在它已经成为一种新的令人激动的研究工具――RNA干扰。
协同抑制(Cosuppression) 基因沉默的一种特殊情况,来源于转基因的RNA与同源内源基因同时被抑制。
静息作用(Quelling) 用于在粉色面包霉菌(Neurospora crassa)中描述协同共抑制。这个术语仅仅用来在真菌中描述沉默。
dsRNA 双链RNA(Double-stranded RNA)通常指长的或者全长的RNA双链。这些大的dsRNA在大多数哺乳动物细胞类型中全面启动宿主细胞的关闭(shutdown);随后细胞开始降低非靶标基因的表达,最终经历凋亡(apoptosis)。
RISC RNA诱导沉默复合体 (RNA-induced silencing complex)即所推测的多蛋白复合物,将siRNA和细胞内mRNA结合到一起,激活裂解机制(可能是内切核苷酸的),释放mRNA并进行降解。
shRNA 短的发夹RNA (Short hairpin RNA)也称短的干扰发夹 (short interfering hairpin);在体内通过RNAi降低互补序列基因的表达。
Pol III 启动子 Pol III 启动子 U6或者HI(Pol III promoter,U6 or HI),通常用来驱动shRNA的产生。Pol III 启动子具有在某一确定起始位点上游启动转录所需要的全部元件。
Pol III 终止子 Pol III终止子( Pol III terminator);4个或者更多个T,提供Pol III依赖的转录终止。
U6 启动子 U6 启动子(U6 promoter)一种pol III型启动子,允许产生确定末端的小RNA(参看pol III启动子)。
入门载体 (entry vector) 包含attL位点,用来克隆DNA片段的Gateway®载体。U6入门载体, pENTR®/U6,专门设计使用U6 pol III型启动子和终止子序列,RNAi靶序列克隆进入后将在哺乳动物细胞中形成shRNA。
目的载体(destination vector) 适合的目的载体(DEST)包含attR位点,可以与入门克隆进行重组,构建表达载体。BLOCK-iT™ RNAi慢病毒和腺病毒 DEST载体接受来自U6入门载体的RNAi框。此外,也有在原核、酵母、昆虫或者哺乳动物系统表达天然蛋白或者融合蛋白的DEST载体可供选择。
LR Clonase 便于attL和 attR位点在LxR Gateway®重组反应中进行重组的一种酶混合物,可以把DNA序列从入门载体转移到目的载体。
ncRNA 非编码RNA(non-coding RNA)
19 2 2 nt siRNA 在细胞中双链RNA一般都被切割成21-23小片段,这样的RNA片段能达到更好的RNAi 作用。人工合成的siRNA也是依据这个原理,所合成的RNA就是19nt的碱基序列再加上两端的识别序列如-GG,-TT等。
SECs (siRNA expression cassettes)siRNA表达框架一种由PCR得到的siRNA表达模版,能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。
Dicer:Dicer酶 RNaseIII家族中特异识别双链RNA的一员,能以一种ATP依赖的方式逐步(processive)切割由外源导入或者由转基因、病毒感染等各种方式引入的双链RNA,切割将RNA降解为19—21bp的双链RNAs(siRNAs),每个片断的3'端都有2个碱基突出(27, 28)。