2011年1月18日, 杜立林实验室在 Nucleic Acid Research 在线发表了题为 A piggyBac transposon-based mutagenesis system for the fission yeast Schizosaccharomyces pombe 的文章,主要报道了一个用于裂殖酵母的高效插入诱变工具。
piggyBac(PB)转座子最初是从粉纹夜蛾Trichoplusia ni中分离出来的,已经在多种真核生物中被用作诱变工具。在这项工作中,我们发现PB在裂殖酵母中具有转座活性。PB转座离开后在原位置极少改变DNA序列,我们利用这一特点在裂殖酵母中开发了一个基于PB的诱变系统。在这一系统中,PB的起始位置是在一个参与氨基酸合成的基因里,造成了细胞的营养缺陷;PB的转座会回复该基因的功能,这个特性方便了我们对于发生转座的细胞的筛选。我们运用高通量测序技术分析了大量的转座子插入位置,发现在该系统中,PB转座没有明显的染色体偏好性。利用此诱变系统,我们筛选到位于klp5, klp6和dam1的能够增强细胞对微管解聚药物thiabendazole的抵抗性的PB插入突变。在另一个遗传筛选中,我们发现在wee1基因中插入PB能够抑制温度敏感突变cdc25-22的致死表型。在这两个筛选中,我们得到了所有预期的突变基因,体现了该PB诱变系统的实用价值。
我所研究生李俊是本文的第一作者,其他贡献者有张家民,李欣,索芳,张美俊,侯文茹和韩敬华。杜立林是本文的通讯作者。本文中样品的高通量测序工作由我所测序中心完成。此课题由科技部973和863项目以及北京市资助,在北京生命科学研究所完成。(生物谷Bioon.com)