众所周知,人类细胞可产生成千上万个不同的microRNA(miRNAs),其中miRNAs是些小片段遗传物质,有助于确定特定时间打开或关闭哪一个基因。miRNAs是正常细胞功能的一个重要部分,但能促发人类疾病,如:特定肿瘤内的一些miRNAs被升高,则会促进细胞存活。为了更好地了解miRNAs如何影响健康与疾病,研究人员首先必须知道哪一个miRNAs作用于哪一个基因,考虑到miRNAs绝对数量与单个miRNA调控成百上千个基因的事实,这是一个很大的挑战。现在,有一种名为miR-TRAP的新方法问世,它使用方便,可直接鉴定细胞内miRNA靶标。
与现有鉴定miRNA靶标的方法相比,miR-TRAP更简单、更精确,主要理由有3个,分别是:首先,miR-TRAP可直接鉴定正常或疾病情况下活体细胞内的miRNA靶标;其次,不仅能识别出被miRNAs减少的mRNA靶标,也能识别翻译被抑制的蛋白质靶标,这一靶标通常不能被其他技术检测出来,如荧光定量PCR或芯片分析;第三,不依赖于抗体,因为抗体能导致非特异性背景信号和复杂数据解释。通过对2个重要miRNAs的13个预测靶标的分析,这项技术不但确认了已知的基因靶标,还揭示了2个新靶标。(生物谷bioon.com)
doi:10.1002/anie.201201512
PMC:
PMID:
miR-TRAP: A Benchtop Chemical Biology Strategy to Identify microRNA Targets
Huricha Baigude, Ahsanullah, Zhonghan Li, Ying Zhou, Tariq M. Rana
It′s a TRAP! microRNAs (miRNAs) are noncoding small RNAs that consist of approximately 21 nucleotides and are assembled into an RNA-induced silencing complex (RISC), which suppresses target mRNA expression. An easy-to-use method called miRNA target RNA affinity purification (miR-TRAP) directly identifies miRNA targets in vivo. This method could be widely used to discover miRNA targets in various disease models under physiological conditions.