(1) 材料
① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液；
② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清；待检鸭血清；
③ ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。
(2) 方法步骤
① 加抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干
② 加待检血清 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干
③ 加酶标抗体 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干
④ 加底物液 → 37℃ 30分钟，加终止液
⑤ 用ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪测定OD值，并计算出P/N比值。
(3) 结果判定 已知阳性血清与已知阴性血清的比值（P/N）≥2.1，而且已知阳性血清的OD值≥0.4；在上述条件成立的情况下，如果待检血清与已知阴性血清的比值（P/N）≥2.1，而且待检血清的OD值≥0.4，则判为阳性，否则判为阴性。
2.双抗体夹心ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒) 本法主要用于检测大分子抗原。现以检测鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）的双夹心抗体ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)为例介绍本法的操作程序。
① 加抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干
② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干
③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干
④ 加底物液 → 37℃ 15分钟，加终止液
⑤ 用ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪测定OD值。
3.双夹心ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒) 此法与双抗体夹心ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)的主要区别在于：它是采用酶标抗抗体检查多种大分子抗原，它不仅不必标记每一种抗体，还可提高试验的敏感性。此法的基本程序为：
① 加抗体（Ab-1）包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干
② 加待检抗原（Ag） → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干
③ 加用非同种动物生产的特异性抗体（Ab-2）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干
④ 加入酶标抗Ab-2抗体（AB-3）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干
⑤ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液
⑥ 用ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪测定OD值。
4.竞争ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒) 此法主要用于测定小分子抗原及半抗原，其原理类似于放射免疫测定。其基本程序为：
① 抗体包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干
② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原（对照孔仅加酶标抗原）→ 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干
③ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液
④ 用ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪测定OD值。
被结合的酶标抗原的量由酶催化底物反应产生有色产物的量来确定，如果待检溶液中抗原越多，被结合的标记抗原的量就越少，有色产物就减少，这样根据有色产物的变化就可求出未知抗原的量。此法的优点在于快速、特异性高、且可用于小分子抗原及半抗原的检测；其主要不足在于每种抗原都要进行酶标记，而且因为抗原的结构不同，还需应用不同的结合方法。此外，试验中应用酶标抗原的量较多。5.阻断ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒) 本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪传染性胃肠炎（TGE）、猪伪狂犬病（PR）及猪胸膜肺炎（AP）的主要检测方法。下面以AP2型抗体的阻断ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测法为例介绍其操作程序：
① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃过夜，洗涤三次、抛干
② 用200μl阻断缓冲液进行封闭 → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干
③ 加工作量1:4稀释被检猪血清100μl → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干
④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分钟，洗涤三次、抛干
⑤ 加100μl工作量猪抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干
⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液
⑦ 用ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪测定OD值。
本试验同时设标准阴、阳性血清对照、兔抗AP2型阳性对照、空白对照。
6.抗体捕捉ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒) 本法主要用于检测IgM抗体。由于IgM抗体出现于感染早期，所以检测出IgM，则可作为某种疾病的早期诊断。抗体捕捉ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)根据所用标记方式不同可分为标记抗原、标记抗体、标记抗抗体捕捉ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)等几种，其中以标记抗原捕捉ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)比较有代表性，该方法的主要程序为：
① 用抗u链（抗IgM重链）抗体包被→37℃ 60分钟后置4℃过夜，洗涤三次、抛干
② 加待检血清 → 37℃ 2小时，洗涤三次、抛干
③ 加酶标抗原 → 37℃ 60分钟，洗涤三次、抛干
④ 加底物液 → 37℃ 20分钟，加终止液
⑤ 用ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪测定OD值。
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