免疫组化染色步骤
1. 石蜡切片脱蜡和水化后,用PBS(pH7.4)冲洗三次,每次3分钟(3x3`)。
2. 根据每一种抗体的要求,对组织抗原进行相应的修复。
3. 如果有必要,每张切片加1滴(试剂A)室温下孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶的活性。
PBS冲洗3x3`。
4. 除去PBS液,每张切片加1滴或50μl的第一抗体(用户自选),室温下孵育60分钟或4℃
过夜,建议参见每种抗体的说明书。
5. PBS冲洗3x5`。除去PBS液,每张切片加1滴或50μl酶二抗聚合物(试剂B),室温下孵
育40分钟或37度孵育30分钟或4度过夜。PBS冲洗3x3`。
6. 除去PBS液,每张切片加1滴或50μl新鲜配制的DAB或AEC溶液(详见DAB或AEC使用
说明书),显微镜下观察3-5分钟(DAB)或10分钟(AEC)。
7. 自来水冲洗,苏木素复染,若有必要,可用0.1%HCl分化,自来水冲洗,PBS返蓝。
8. 如果用DAB显色,则切片经梯度酒精脱水干燥,(二甲苯透明),中性树胶封固;如果
用AEC显色,则切片不能酒精脱水,而直接用水性封片剂。封片。