有关体外生物诊断试剂说明书撰写的建议
http://www.cde.org.cn 发布时间：2003/09/24 01:40:06 PM
有关体外生物诊断试剂说明书撰写的建议
生物制品及体外诊断试剂组 张丽
为加强药品监督管理，规范药品的包装、标签和说明书，以利于药品的运输、贮藏和使用，保证人民用药安全有效,国家药品监督管理局于2000/10/15日发布了关于《药品包装、标签和说明书管理规定》的第23号令，对药品包装、标签和说明书的撰写，作了明确的规定。但体外生物诊断试剂作为一种诊断用药,在说明书的撰写方面与治疗用药品的说明书有许多不同, 又由于诊断试剂产品的学科跨度大、品种繁杂，申报单位对于如何撰写体外生物诊断试剂的说明书不十分明确，在审评过程中，说明书反复修改的比列较高，严重的影响了整体审评效率。现参照23号令、EMEA、FDA、IFCC等有关文献，对体外生物诊断试剂说明书格式、说明书中各项内容的书写提出建议，并附一个产品说明书范例（虚拟），以供研发者在书写产品说明书时参考、借鉴。
一 体外生物诊断试剂说明书格式：
××××说明书
【药品名称】
通用名：
商品名：
英文名：
汉语拼音：
【使用目的】
【试验原理】
【主要组成成份】
【适用仪器】
【样本要求】
【试验方法】
【对试验结果的解释】
【该试验方法的局限性】
【产品性能指标】
【注意事项】
【包装、规格】
【贮存】
【有效期】
【批准文号】
【生产企业电话及传真】
企业名称：
地 址：
邮政编码：
电话号码：
传真号码：
网 址：
二 各项内容书写的说明：
【药品名称】
1. 通用名；汉语拼音；英文名：
通用名须采用国家批准的法定名称。
如该品属《中国生物制品规程》（以下简称“规程”）收载的品种，其通用名、汉语拼音及英文名应与“规程”一致；非规程收载的品种，其通用名称须按体外生物诊断试剂的命名原则命名既：被测物+方法+诊断（检测）+试剂（盒）
2．商品名：不得用外文字母、汉语拼音或阿拉伯数字代替。不应造成医疗使用的误解或不便，不能暗示使用目的，应有工商行政管理部门核准注册的报告。【使用目的】
说明使用目的如：定性或定量测定、筛查、家用、确认等。
【试验原理、方法】
详细说明试验原理、方法，该试验的优点及其局限性。
【主要组成成份】
1.对于供应商提供的试剂组份： (1)说明名称、数量、每个组成成份在反应体系中的比例或浓度，如果对于正确的操作很重要，应提供其生物学来源、活性及其它特性。(2)明确说明不同批号试剂盒中各组份是否可以互换。
2.对于供应商没有提供，但对该试验必须的试剂组份：供应商应列出此类试剂的名称、纯度，提供稀释或混合方法及其他相关信息。
3. 对于标准品（校准品）和质控品：（1）说明主要组成成份和其生物学来源。（2）注明标准品（校准品）的定值及其溯源性。注明标准品的定值、质控品的允许范围。
【适用仪器】
应提供与仪器有关的所有信息以便用户能够作出最好的选择。
【样本要求】
应在以下几方面进行说明：
1.在样本收集过程中的特别注意事项，包括该试验要求患者所作的准备工作。
2.为保证样本各组份稳定所必须的抗凝剂或保护剂。
3.已知的干扰物。
4.能够保证样本稳定的贮藏、处理和运输方法。
【试验方法】
为保证试验的正确进行，应在以下几方面，对试验的每一步进行详细说明：
1. 试剂配制：各试剂组份的稀释、混合及其它必要的程序，包括试剂的贮藏条件、工作液的稳定性，以及作为稀释剂或作为溶剂的液体种类。列出不稳定或变性的物理、生物或化学指标。
2. 必须满足的试验条件：如 pH值、温度、每一步试验所需的时间、波长、最终反应产物的稳定性等。试验过程中必须注意的事项。
3.校准程序（如果需要）：标准品（校准品）的准备和使用，空白的使用及标准曲线的绘制。
4.质量控制程序：质控物的使用、质量控制方法。
5. 试验结果的计算，包括对每个系数及对每个计算步骤的解释。如果可能，应举例说明。
6. 参考值及其确定方法。
【对试验结果的解释】
说明可能对试验结果产生影响的因素，说明在何种情况下需要采用更特异或更灵敏的方法进行确认试验，建议采用的试验方法。
【该试验方法的局限性】
说明该试验方法的局限性。
【产品性能指标】
说明该产品的性能指标包括灵敏度、准确性、特异性、精密度、可报告范围等。
【注意事项】
注明必要的注意事项如本品仅用于体外诊断等。
【包装、规格】
注明可测试的样本数。
【贮藏】
具体条件（温度、干湿、明暗）的表示方法按药典要求。
【有效期】
系指被批准的该产品使用有期限。
【批准文号】
系指国家批准的生产文号。
【生产企业】
系指该产品的生产企业，按下列方式列出：
企业名称：
地址：（须标详细地址）
邮政编码：
电话和传真号码：须标明国内区号。
网址：(如无网址可不写，此项不保留)
三 范例：
****定量测定试剂盒（酶联免疫法）
说明书
[药品名称]
通用名：****定量测定试剂盒（酶联免疫法）
[使用目的]
用于EDTA抗凝全血样本中****的定量测定。
[试验原理]
****是一种来源于真菌、具有很强的免疫抑制性的大环内脂。它可以抑制混合的淋巴细胞反应产生T细胞毒素，在临床上有很好的免疫抑制效果。****抑制细胞内的磷酸脂酶，使IL-2和IL-2受体对激活的T细胞产生免疫抑制性。****是通过肝脏中的P450 IIIA酶代谢，其中5%通过尿液排泄，95%通过胆汁排泄。
****主要用于防止肝移植患者的器官受损，也可用于肾、心和骨髓移植等患者。虽然****有很好的临床疗效，但也会产生副作用，其副作用与环孢A 大致相似如会引起肾中毒，胃肠不好和神经中毒等一些病症。
本品采用了竞争法酶联免疫试验原理：用羊抗鼠IgG包被微孔板，将标准品、质控和样本加入酶标板、再加入****单克隆抗体，在室温下孵育30分钟后加入****辣根过氧化物酶工作液后孵育60分钟，洗板。再加入显色剂孵育15分钟。最后加入酸终止反应，通过双波长450/630纳米测定吸光度，反应产物颜色与样本中的****含量成反比，通过标准曲线得到样本中****的浓度。
[试剂主要组成成分]
1、酶标板 96孔/板 抗鼠IgG包被。
2、抗体 8ml/瓶 保存于TRIS缓冲液中的鼠****单克隆抗体。
3、酶标记物 2ml/瓶 辣根过氧化物酶标记的****。
4、酶标记物稀释液 9 ml/瓶
5、标准品 五瓶 0.5ml/瓶
保存在全血样本中的纯****，添加有防腐剂。标准品的浓度为 0.3、1.0、3.0、10、30ng/ml，可直接使用。储存在零下18至25摄氏度可稳定至效期。允许三次冻融。该标准品经FUJISAWA医药公司高度提纯的****标定。
6、零标准品NSB 2ml/瓶
保存在全血样本中并添加有防腐剂，可直接使用.储存在零下18至25摄氏度可稳定至效期，允许三次冻融。
7、质控物 二瓶0.5 ml/瓶 靶值及允许范围分别为:
保存在全血样本中的纯****并添加有防腐剂，可直接使用，储存在零下18至25摄氏度可稳定至效期，允许三次冻融。
8、显色剂 22ml/瓶 TMB
9、终止液 50ml/瓶 2N H2SO4
10、浓缩洗液 50ml/瓶
11、消化试剂 10 ml/瓶 含有皂角甙和钙的蛋白酶冻干混合物
12、盖板 1个
[仪器]
1、 具有双波长检测能力的酶标仪。
2、 微孔板清洗器。
[样本要求]
50微升EDTA抗凝的全血样本。
采静脉血于5或10ml空玻璃管中，使用EDTA作抗凝剂（7.2mg/5ml全血）。如果样本不立即使用，可在零下18至25摄氏度储存6个月。对于没有立即处理的新样本或已经储存在零下18至25摄氏度的样本，试验前需完全混匀。新样本和冷藏样本的测定结果有一定的区别，因此针对同一患者，应使用同一种类型的样本。（也就是说应使用新样本或使用冷藏样本而不应将两者混合），高浓度的脂类、胆红素或微生物污染对测定结果的影响尚未确定。
[试验方法]
1、将浓缩洗液按1:10的比例用蒸馏水或去离子水稀释。
2、取每个浓度的标准品、零标准品NSB、质控物和样本50μL加入相应标签的试管中。
5、用蒸馏水或去离子水复溶20ml消化试剂，该试剂可以在室温下放置10分钟，完全混匀后30分钟内使用，剩余部分应立即冷冻保存。该试剂允许三次冻融。
6、取300μl复溶消化试剂加入每个试管中，用盖将管口盖好，将所有的试管涡流震荡15至30秒钟。
7、在室温下孵育13至17分钟。
8、将试管转移到74至76摄氏度的水槽中孵育13至17分钟。
9、将试管从水槽中取出，涡流震荡15至30秒种。
10、在室温下将试管以1800Xg的速度离心10分钟。
11、取每个样本的上清液100μL放入微孔板中，每个样本都需要双孔测定。
12、取50μl****单克隆抗体放入除NSB的其它微孔板中，取50μl酶标记物稀释液放入NSB孔中。
13、用封口膜和板盖将板孔盖好，将整块板固定在震荡器上，并在室温下以650RPM至750RPM震荡28至32分钟。
14、按1:4的比例稀释酶标记物（例如：1ml酶标记物+4ml酶标记物稀释液），应准备好足够量的稀释酶标记物做当天的测试。剩余的稀释酶标记物要扔掉。
15、取50μl稀释后的酶标记物放入每个孔中，
16、用封口膜和板盖将板孔盖好，将整块板固定在震荡器上，并在室温下以650RPM至750RPM震荡55至65分钟。
17、用大约300μl洗液清洗每个孔三次，将板倒置将孔内剩余的洗液倒在吸纸上。
18、在5分钟内，取200μL显色剂加入每个清洗微孔板中，用封口膜和板盖将微孔板盖好，将整块板固定在震荡器上，并在室温下以650RPM至750RPM震荡14至16分钟。
19、取100μl终止液加入微孔中。颜色变化从蓝到黄。充分混合确保完全终止反应。
20、在450/630纳米的双波长下测定吸光值，要求在终止反应5分钟内完成。
21、从标准曲线上读取样本和质控物的浓度。
[实验过程中应注意]：
1、NSB的吸光值应小于0.200 。
2、在加入试剂时应沿着孔壁加入，以免外溅。
3、显色剂和酶标记物要避光。
4、酶标记物是一种粘液，要小心加入以确保结果精确。
5、如果某一个样本的吸光值高于最高浓度标准品的吸光值，用零标准品NSB 以1:2或1：4的比例稀释样本后重新测试，测试结果乘以相应的稀释倍数。稀释倍数不应大于1：4。
[质量控制]：每个酶标板上至少采用两个浓度的质控物进行质量控制，以确保每个酶标板测定结果的可靠性。
1、零标准品NSB的最小吸光值≥1.500。
2、质控物的平均值在允许范围内。
3、4PL曲线方程的C参数5.0。
4、重复样本的测定结果相差在15%以内。
如不能同时满足上述条件，则此酶标板的试验结果无效，全部试验需重新进行。
[测定结果的计算]：
1、计算每个标准品、质控和样本的平均吸光值。
2、使用对数线性图纸，X轴为浓度的对数值，Y轴为吸光值的对数值。通过每个标准品的平均吸光值和其浓度建立标准曲线。
3、从标准曲线上查出样本的FK 506浓度值。吸光值不在标准曲线之内的样本既其浓度小于0.3ng/ml或大于30ng/ml的样本，其测定结果无效。
4、实际上，大多实验室使用计算机数据管理系统。本公司使用具有4参数曲线的Multicalc®数据管理系统。范例如下所示：
表一：标准品和样本测定结果
复孔吸光值 平均吸光值 浓度
(ng/ml)
O 标准品 2.626
2.582
标准品
A 2.377 2.359 0.3
A 2.342
B 2.000 1.972 1.0
B 1.944
C 1.923 1.290 3.0
C 1.287
D 0.567 0.558 10.0
D 0.548
E 0.292 0.294 30.0
0.297
未知浓度样本
1 1.476 1.451 2.36
1.426
2 0.373 0.367 19.28
0.361
图一：
横轴：浓度（ng/ml） 纵轴：吸光值
表一和图一为范例标准曲线。该信息仅供参考，不应用来计算任何值。
[参考值]
目前临床研究还未确立全血样本中有效****浓度的治疗范围。患者之间对****的吸收和清除差别很大。对****治疗的临床反应和用药剂量一致性很差。临床状态的复杂性、个体间对免疫抑制、肾毒性和****毒性效应的敏感性不同，与其他免疫抑制剂的协同用药，移植后时间以及其它许多因素导致对最适****血药浓度的需要不同。仅凭个体的****浓度值并不能作为改变治疗方案的指标。
据Lake Louise报道：虽然尚未确立****治疗范围，但用药后12小时之内的建议浓度为5-20ng/ml。副作用引起的事故率随全血****浓度的升高而升高。
[该实验的局限性]：
1、本品只能用于EDTA抗凝全血样本的测定而不能用于其他体液样本。
2、通过其他方法得到的****值与本品测定结果不具有直接的可比性。
3、该实验对某些****的代谢物是非特异性的，并且对某些****的代谢物具有交叉反应（表6）。当****代谢减弱（例如：在胆汁郁积的情况下），**** 代谢物可能造成堆积，这种情况下应采用HPLC/MS/MS方法进一步验证样本中****的浓度。
4、注意：诊断或治疗中接受过鼠单克隆抗体制剂的患者样本中会含有人抗鼠抗体（HAMA）。这些样本经利用鼠单克隆抗体的分析试剂盒检验时，所得结果会偏高或偏底。这些样本不能利用本试剂盒进行分析测定。
[产品性能指标]
注意：该数据是通过使用下例仪器得出：Denley WellprepTM4微孔板清洗器，Diasorin XL 5000微孔板酶标仪，Bio—Tek ELP—40微孔板脱色清洗器，Bio—Tek仪器EL X 800微孔板酶标仪。
1、灵敏度：
1.1分析灵敏度：
分析灵敏度：0标准品吸光均值减去2倍标准偏差所对应的浓度值。本品分析灵敏度为0.27ng/ml。
1.2功能灵敏度：
功能灵敏度：用零标准品稀释患者样本至0.5—2.0ng/ml，每个样本重复8孔测试以确定变异系数CV%，CV=20%处的浓度定义为功能灵敏度。本品的功能灵敏度为1.0 ng/ml。
2.精密度：
根据NCCLS指导文献EP5-T2：在20天内，每天测定一次添加有****的三个浓度全血样本进行精密度分析。计算批内变异和三个批号试剂盒测定的总变异。在5—20ng/ml的浓度范围内，批内变异小于10%，总变异小于15%。结果如表2。
表二：精密度试验结果
N 平均值 SD 批内CV 总CV
80 3.8 0.3 7.5% 8.8%
80 8.0 0.5 6.5% 7.2%
80 16.3 1.4 8.7% 9.8%
3.测定范围：
用零标准品稀释添加有****的高浓度全血样本，以确定本品的测定范围。本品测定范围为1.0—30ng/ml。
4.回收率：
将已知浓度的****加入到EDTA抗凝的全血样本中，得到浓度为5ng/ml、10 ng/ml、和20 ng/ml的样本，测定上述样本并计算回收率，结果如下：
表三：回收试验结果
添加****浓度 测定结果（N=40） 回收率
5ng/ml 3.9±0.2ng/ml 78%
10ng/ml 8.2±0.4ng/ml 82%
20ng/ml 16.9±0.8ng/ml 84%
5.干扰性化合物的干扰试验和交叉反应
参考NCCLS指导文献（EP7—P）进行干扰性试验：通过向含****的全血样本中添加2.5倍治疗水平浓度的潜在干扰化合物。所有样本做5次重复测定。如果平均测定浓度小于加入浓度的15%，则该化合物确定为无显著性干扰。下列药物在所测定浓度下都无显著性干扰。
表四：潜在干扰性化合物的干扰试验结果
检验药品 检验浓度 检验药品 检验浓度
乙酰 40ul/mL Ganciclovir* 1000 ul/mL
阿昔洛韦* 1000 ul/mL ltraconazole 10 ul/mL
阿米卡星 60 ul/mL 酮康唑 10 ul/mL
两性霉素B 20 ul/mL 利多卡因 10 ul/mL
咪唑疏嘌呤 1 ul/mL 霉酚酸 600 ul/mL
Azithromycin* 5 ul/mL 甲基强的松龙 100 ul/mL
长乌西平 20 ul/mL 心痛定 60 ul/mL
头孢唑啉 150 ul/mL 青霉素 100 ul/mL
头孢曲松 500 ul/mL 苯巴比妥 80 ul/mL
西米地丁 10 ul/mL 苯妥英 40 ul/mL
Clarithomycin 5 ul/mL 强的松 10 ul/mL
环孢菌素* 1000 ul/mL 雷尼替丁 1 ul/mL
地高辛 5 ul/mL Rapamycin 5 ul/mL
红霉素 5 ul/mL 妥布霉素 20 ul/mL
Famotidine 10 ul/mL 甲氧苄啶 5 ul/mL
Fluconazole 15 ul/mL 新诺明 150 ul/mL
呋塞米 100 ul/mL 丙戊酸 200 ul/mL
庆大霉素 20 ul/mL 维拉帕米 1 ul/mL
*10倍于治疗水平浓度下检测
参考NCCLS指导文献（EP7—P）进行交叉反应试验：通过向含有5ng/ml亲本药物的全血样本中加入5ng/ml的代谢物以确定代谢物的交叉反应性。试验结果表明：代谢物的交叉反应性和有关文献报道基本一致。
表五： ****代谢物的免疫交叉反应试验结果
代谢物 修饰基团 交叉反应
M-1 （13-0-脱甲基-） 0%
M-2 （31-0-脱甲基-） 85%
M-3 （15-0-脱甲基-） 38%
M-4 （12-0-羟基-） 0%
M-5 （15，31-0-双脱甲基-） 44%
M-6 （13，31-0-双脱甲基-） 0%
M-7 （13，15-0-双脱甲基-） 0%
M-8 （31-0-双脱甲基，重排） ND
ND=not determined（不确定）
内源物质的干扰：加入潜在的内源性干扰物质进行内源物质的干扰试验，结果表明：蛋白质或胆红素水平升高会影响试验结果。
表六：内源性物质的干扰试验结果
潜在的内源性干扰物 终浓度 加入前样本中****浓度（ng/ml） 加入后****测定结果（ng/ml） 误差%
甘油三酯 8.0mg/ml 3.0 2.6 13%
9.9 9.2 7%
18.1 16.2 10%
尿酸 0.4mg/ml 3.0 2.6 13%
9.5 9.8 3%
19.0 18.0 5%
胆红素 0.4mg/ml 3.0 3.6 20%
9.5 11.5 21%
19.0 21.1 11%
蛋白质(人血清白蛋白） 25.0mg/ml 3.0 2.3 23%
9.5 8.2 14%
19.0 17.6 7%
6.不同方法之间的相关性：
取服用**** 的35个患者的95个EDTA抗凝全血样本，用本试剂盒和HPLC/MS/MS方法进行方法间比较试验。用散点图和Bland/Altman分析处理数据。
散点图
横轴：通过HPLC/MS/MS得到****浓度（ng/ml）
纵轴：通过本品得到****浓度（ng/ml）
斜线为拟合线
Bland/Altman分析
横轴：平均值（ng/ml） 纵轴：差值（ng/ml）
通过Bland/Altman分析的方法比较：两种方法之间的平均偏差为0.8±2.3ng/ml。
[注意事项]：
1、该试剂盒应作为具有潜在的传染性试剂处理
2、该产品在制备过程中所用的每个血清或血浆原料已经FDA批准的实验方法检测，他们对HBsAg、ANTI-HCV和HIV无反应。但即使使用高度准确的方法，也不会保证对所有的传染性因素进行检测。由于没有一个明确的测试方法能完全保证不会出现HBsAg、ANTI-HCV和HIV或其它传染病毒，所以所有的产品包括来自人体的物质都应按良好的实验室规范，按疾病预防和控制中心（CDC）的有关要求进行预防。
3、含＞0.4%ProClinTM 150的试剂盒可能会引起过敏反应。应避免将试剂与皮肤长期接触，试剂处理后充分洗手。
4、含TMB的试剂在实验室试验中会诱发其它反应。
5、含硫酸的试剂危险，会引起严重烧伤。注意不要将试剂溅到眼睛、皮肤或衣服上，一旦接触到试剂，应立即用足量的水清洗眼睛和皮肤。R34会引起烧伤。S26一旦与眼睛接触：应立即用足量的水清洗或找医生帮助。
[规格]： 96人份/盒
[储藏]：冷冻组分-18至-25℃，冷藏组分2至8℃
[有效期]：9 个月
[批准文号]：
[生产企业]： 公司
[地址]：
[电话]：123456
