血细胞计数板-血球计数板的构造

随着高新技术的不断出现，白细胞分类计数已由电阻抗法的三分类发展为同时使用多项技术联合检测白细胞，综合分析各项数据，可得出较准确的分类结果。这些技术包括体积分析、激光分析、高频传导分析、光散射分析和细胞化学等，但目前所用的普通血细胞分析仪仍不能对某些细胞进行准确识别，如白血病细胞、单核细胞、异常不典型淋巴细胞等。各类五分类血细胞分析仪的质量保证有赖于参考方法的建立。目前，白细胞分类计数的参考方法仍然是手工分类法，即将血涂片进行瑞氏染色后，在显微镜下对各种白细胞进行分类。手工分类法的不足之处在于：(1)技术人员进行细胞分类时，存在主观因素的影响；(2)由于单核细胞、嗜碱性粒细胞数量较少，分类时不能保证其结果准确度和精密度；(3)血片细胞分布不均。
Hiibl等研究了使用流式细胞术进行白细胞五分类法，这种方法使用了三种荧光染料标记的单克隆抗体对不同白细胞进行染色：FITC标记的抗CD45,PE/CYS标记的抗CD14，PE标记的抗CD2、抗CD16、抗HLA-DR单克隆抗体混合物。根据各种白细胞表面抗原分布的不同对白细胞进行分类（表1见书42页）。
　　染色前先用细胞稀释液破坏红细胞，白细胞因表达CD45而与细胞碎片区分开。嗜酸性和嗜碱性粒细胞不能被PE标记的单克隆抗体混合物染色或染色较浅，且CD14阴性，而与其他细胞相区分，被框入LSS(侧向光散射)/CD45直方图内。在LSS/CD45直方图内嗜酸性和嗜碱性粒细胞因表达CD45的强度不同及侧向光散射特征存在差异而被分开。单核细胞表达CD14，同时结合其侧向光散射特征而被框入LSS/CD14区。单核细胞以外的细胞根据侧向和前向光散射（FS）特征差异而在LSS/FS直方图中分为两群，一群包括淋巴细胞和嗜碱性粒细胞，另一群包括中性粒细胞和嗜酸性粒细胞。从淋巴细胞、嗜碱性粒细胞中减去嗜碱性粒细胞即为淋巴细胞，从总数（100％）中减去嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞相对数，即得中性粒细胞相对数。
　　根据CD14区分单核细胞时，有少量CD14阴性单核细胞可被漏检，而在区分嗜酸性粒细胞时，排除中性粒细胞是根据中性粒细胞表达CD16，若存在大量CD16弱表达的成熟中性粒细胞，则这部分中性粒细胞会干扰嗜酸性粒细胞计数，使嗜酸性粒细胞结果偏高，这种情况主要见于炎症反应。研究还发现，选择不同的标本处理方法和流式细胞仪，虽然所得结果相关性较好，但不同细胞亚群计数结果间的差异具有明显的统计学意义，这体现了方法学选择的重要性。流式细胞仪白细胞五分类法综合运用多种细胞表面标志和光散射特征对白细胞进行识别，具有较高的特异性，其计数结果与手工分类法相关性较好，而且重现性远远优于手工分类法，有望成为白细胞分类计数的参考方法。
　　综上所述，由于高新技术的发展和应用，全血细胞计数及其相关指标检测的参考方法也在逐步发展。血红蛋白及红细胞比积测定的参考方法相对较易建立，而全血细胞计数由于影响因素较多，难以建立合适的参考方法。以往手工操作的方法，由于主观因素影响和实际所能达到精度的限制，已越来越不适应于现有的要求，半自动或全自动分析方法可能逐步取代手工操作成为参考方法。流式细胞术及细胞标记技术的发展及应用，极大地促进了细胞计数和分类的发展，将是今后主要的发展方向之一。